1 材料与方法 1.1 材料 微绿球藻、隐藻和颤藻均分离自广东省湛江市东海岛的对虾养殖池,保种于中国水产科学研究院南海水产研究所;地衣芽孢杆菌由中国水产科学研究院南海水产研究所自行筛选、分离保存。
1.2 方法
1.2.1 培养条件 微藻以500 mL 锥形瓶培养,恒温循环器水浴控温,温度为26~28 ℃,光照强度4 000 lx,光暗比12∶12,盐度15,每3 h 摇动藻液1 次,实验周期为16 d。
1.2.2 容器及培养液的处理
锥形瓶经120 ℃高温灭菌备用。 无机培养液:陈海水煮沸冷却后加入NaNO3、KH2PO4 和柠檬酸铁,使N、P 和Fe 的浓度分别达到14、2 和0.14 mg·L-1。 对虾养殖池水培养液:从养殖池取水用氯仿固定,测其氮、磷和COD 作为本底参照,再取养殖水煮沸测氮、磷和COD,以NaNO3、KH2PO4 和饵料浸出液调节至符合本底的无机氮0.63 mg·L-1、无机磷0.40mg·L-1、COD 7.80 mg·L-1。
1.2.3 实验分组
以无机培养液和对虾养殖池水培养液分别对3种微藻做单种藻和地衣芽孢杆菌混合培养,另设不加菌的微藻培养作为对照。每个组设3 个平行。 在对虾养殖池水培养液中分别将3 种微藻两两混合培养及3 种藻混合培养,加入地衣芽孢杆菌,另设不加菌的微藻培养作为对照。每个组设3 个平行。
1.2.4 接种
将藻液以10 000 r·min-1 离心5 min,去掉上清液;重复洗涤,离心1 次,去除原培养液中的营养;接入500 mL 锥形瓶中,使各种微藻的初始密度均为7×104 cells·mL-1。地衣芽孢杆菌液以8 000 r·min-1 离心10 min,去掉上清液;重复洗涤,离心1 次,接入500 mL 锥形瓶中,使地衣芽孢杆菌细胞密度达到5×104 CFU·mL-1。
1.2.5 取样及测定
每2 d 取1 次藻样,以甲醛固定,用血球计数板在显微镜下计数(颤藻经过超声波破碎后计数),取得细胞数(N2d)。地衣芽孢杆菌以稀释平板法计数[12],每2 d 测定1 次。
1.3 统计分析
以配对样本t 检验分析加菌对藻细胞密度的影响;以简单相关分析法分析地衣芽孢杆菌和各种微藻细胞增长的相关性;以通径分析法分析地衣芽孢杆菌和各种微藻对颤藻的影响。 |