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在线交流 | 如何扩培沼泽红假单胞菌、乳酸菌种、芽孢杆菌?

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    本帖最后由 一片云 于 2016-6-24 09:19 编辑

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    沼泽红假单胞菌、乳酸菌种、芽孢杆菌扩培及应用

         ——湖北生物科技职业学院老师周鑫军

    480X280在线交流.jpg



    沼泽红假单胞菌(光合细菌的一种)、乳酸菌种、芽孢杆菌,一说到这几种菌,相信作为水产人的我们再熟悉不过了,可能很多人还经常使用这些菌种。对于如何培养光合细菌?如何培养乳酸菌?如何培养芽孢杆菌呢?阴雨天能不能使用光合细菌?为什么养殖水体中需要经常性反复投放活菌制剂?什么时候使用它们最有效果?什么情况下使用哪种菌?这些你了解多少呢?本期请听我们的嘉宾来给大家讲讲沼泽红假单胞菌、乳酸菌种、芽孢杆菌扩培及应用。


    时间:

    616日(周四)晚19:30(讲沼泽红假单胞菌扩培及应用)
    618日(周六)晚19:30(讲乳酸菌和芽孢杆菌的扩培及应用)



    地点:     1、本期课程采用在线直播形式

                 2、并于中国水产频道  【在线交流】栏目  同步直播


    嘉宾简介:                                          

    周鑫军_副本.jpg

    水生动物类执业兽医师,武汉鑫华生环保科技有限公司总经理,湖北生物科技职业学院老师


    提纲

    1、沼泽红假单胞菌扩培及应用
      沼泽红假单胞菌简介
      沼泽红假单胞菌在水产养殖中的主要作用
      沼泽红假单胞菌的正确使用
      一级扩培、二级扩培方法
      
    2、乳酸菌种的扩培及应用
      乳酸菌简介
      乳酸菌在水产养殖中的作用
      乳杆菌简易扩培方法
      乳杆菌简易扩培案例
      如何做到科学的在水环境中使用乳酸菌制剂?
      
    3、芽孢杆菌的扩培及应用
      枯草芽孢杆菌的简介
      用于水体环境的主要作用
      芽孢杆菌的简易扩培方法
      实践中芽孢的“活化”


    《沼泽红假单胞菌扩培及应用》文字内容在:10-18楼

    http://www.fishfirst.cn/forum.php?mod=redirect&goto=findpost&ptid=68045&pid=351561&fromuid=53209


    《沼泽红假单胞菌的扩培与应用》

    课件下载:

    芽孢杆菌的扩培及应用(1).zip (1.3 MB, 下载次数: 44, 售价: 50 元金币)

    菌种的衰退、复壮和保藏.zip (1.73 MB, 下载次数: 46, 售价: 50 元金币)

    课程录音:




    《乳酸菌和芽孢杆菌的扩培与应用》

    乳酸菌的文字内容在:36-50楼

    http://fishfirst.cn/forum.php?mod=redirect&goto=findpost&ptid=68045&pid=352329&fromuid=53209

    芽孢杆菌的文字内容在:51-58楼

    http://www.fishfirst.cn/forum.php?mod=redirect&goto=findpost&ptid=68045&pid=352349&fromuid=53209

    课件下载:

    乳酸菌种扩培及应用.zip (2.49 MB, 下载次数: 371, 售价: 50 元金币)

    芽孢杆菌的扩培及应用(1).zip (1.3 MB, 下载次数: 42, 售价: 50 元金币)


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    本帖最后由 一片云 于 2016-6-23 18:17 编辑



    讲课录音:




    今晚我们将以图片+讲解的方式进行交流

    我们现在正式开始讲

    感谢水产前沿,感谢中国水产频道,感谢主持人以及各位同仁们给我这次机会和大家进行交流。

    先说一下小高,小高是2015年11月份到武汉参加我们华中农业大学和我们公司共同举办的渔药、鱼肥、饲料销售人员的培训班,我们在一个班上认识的,他很好学也很敬业,这次不幸查出了白血病,当天我知道知道后给他捐了2000块钱,也鼓励他挺过去。但是目前还远远不够,也希望各位同仁们能够继续帮他。

    我们今晚讲讲水产养殖业常用活菌制剂简易扩培技术及应用原理。我们首先讲讲沼泽红假单胞菌,它属于光合细菌。

    幻灯片1.JPG


    我们市场上常用的光合细菌实际上有很多种,从微生物学的角度上讲,光和细菌是一大类能够进行光合作用的原核生物的总称。它分为产氧的光合细菌和不产氧的光合细菌这两大类。

    我们从微生物学的分类上把产氧的光合细菌(主要是蓝细菌),或者称之为蓝藻和原绿藻在分类学上是属于藻类的,也就是讲在微生物的领域里面有一部分的藻类也被划分为微生物了,这和水产的浮游植物和浮游动物是有区别的。

    我们这里所说的光合细菌是指能够在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用的原核生物。通常来讲分为4个科,红螺菌科、着色菌科、绿菌科、区绿菌科,主要特征含有光和色素,叫菌绿素,能够在厌氧光照条件下进行光合生长而且不产氧。

    目前在市场上见到的光和细菌的剂型大约有这么几种,量最大的是液体制剂:有液体的浓缩液,还有固体制剂,还有冻干粉,相对而言液体制剂容易批量的培养、批量的生产,培养物的活性较强,也就是说液态的光合菌的活性会强于固体。

    光合细菌的代谢产物非常多,含量也很丰富,应用的效果也非常好。目前在各种剂型当中,液态的是使用量最大的一种。

    幻灯片2.JPG



    我们目前应用在水产养殖业中的光合细菌主要是光能异养型的红螺菌科中的一些品种,所以目前我们看到的光和细菌无论是哪个厂家生产的,主要以红色的为主,我们这里主要介绍的是沼泽红假单胞菌,根据农业部1126号公告,2008年发的公告,准许沼泽红假单胞菌以饲料添加剂的方式适用于养殖动物。

    而目前没有一个相关国家的规定说,我们水产养殖业当中用于外环境中的微生物给它一个具体的要求,说哪些能用,哪些不能用,因此目前这个区域来说还处于一个不太监管的状况。

    幻灯片3.JPG

    我们说的沼泽红假单胞菌,它的名字比较绕口,我解释一下,它首先是一个假的单胞菌,然后它的颜色是红色的,另外一个它的最初发现是在沼泽地的水源地发现的,所有科学家就以沼泽红假单胞菌命名了,它的适宜的生长水温是15-40度,指的是适宜水温,并不是说它的上限或下限,最适宜的水温是30-36度,它属于兼性厌氧菌,属于革兰氏阴性菌,它以小分子有机物、二氧化碳等作为碳源,以氨、氨盐、亚硝酸、硝酸盐作为氮源。

    沼泽红假单胞菌菌体蛋白质含量高,并且含有大量的促进鱼虾生长的活性因子,比如说生物素、维生素、β类的胡萝卜素,可以明显的促进养殖生物的生长发育,缩短了养殖周期,这个用在畜禽饲料中已经是验证过了,相关的文献大家可以在网上查一下,而且这个菌的特点它具有适应性强,能够耐受高浓度的有机废水、较强的分解转化能力,对酚、氰等毒物也有一定的耐受和分解能力,因此我们经常用于生活污水、工业污水包括畜禽饲料水的处理当中。

    沼泽红假单胞菌最开始是用在污水处理上,我们目前把它用在畜禽养殖和水产养殖业上,效果也是相当不错。
    菌种的来源和大家说一下,菌种的来源是我们农业微生物学国家重点实验室,这个实验室就设在位于武汉的华中农业大学,在我们校园内,一级扩培是通过生命科学技术学院来完成的,我们做的是二级扩培,做的是成品,也就是说我们把菌种做成商品,当然我们做的都是原种。

    幻灯片4.JPG


    幻灯片5.JPG


    我简单的介绍一下,课件上都有。科技部2003年12月正式批准立项建设的8个国家重点实验室之一。目前以农业有益微生物的利用和有害微生物的防治为主要的研究内容,它的主要作用是选种、保种、育种。

    幻灯片6.JPG


    幻灯片7.JPG
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    幻灯片8.JPG


    幻灯片9.JPG


    幻灯片10.JPG


      我们接下来来看一下生产沼泽红假单胞菌后用于污水处理的案例。大家可以看得到在这个案例上的是黄孝河,大家看到课件上的两张图片,左边的一张是地上放了很多红色的用5L的瓶子装的菌液(刚刚生产出来),右边一张是黑臭的,基本无氧的污水河,这是生活污水,不管是表层还是底层溶氧基本为零,污染程度非常严重的,在这种环境下,通过曝气来氧化一部分有机物质,另外通过滴灌从天亮开始一直滴到天黑,并把沼泽红假单胞菌投入到污水当中。
      


    幻灯片11.JPG


      在武汉机场河的臭水沟当中也运用到了沼泽红假单胞菌,也是通过水体的曝气,加上天亮之后,天黑之前沼泽红假单胞菌的投放结合起来来处理这个臭味,主要是把臭味消掉。

      在污水处理的过程当中,我们大家可以借鉴一下,我们是每天连续大量的在污染水体当中投放沼泽红假单胞菌,消耗大量的氮、磷等营养因子,一定程度上也会抑制浮游植物的生长,因为它可能会起到一定的竞争作用。刚才我们说它的代谢产物又会使浮游植物利用它的代谢产物来生长,这个要看你投多少,水产养殖业当中不可能像处理污水一样,每天投的沼泽红假单胞菌的量那是完全不一样的,因为处理生活污水和有机废水是天天投,几乎是水产养殖的几十倍甚至上百倍,并且这个成本是不计的,而我们的水产养殖业可能是多少天才投一次,所以这个量不可同日而语。

    幻灯片12.JPG


      首先它消除臭味的物质直接的吃掉氨氮、硫化氢,当然还有很多种。我们说的吃掉大家可以这样去理解,这就是一种通俗的理解方式。之前我们说过了它对氨、氨盐、亚硝酸盐、硝酸盐都可以把它利用掉,所以它可以间接或直接减少一部分亚硝酸盐的产生。另外通过进水的作用,它还可以间接的产生增氧的效果。这个增氧的效果是如何产生的呢?因为它消耗掉了很多物质之后,能够提供代谢产物,又能让浮游植物间接的大量繁殖,而浮游植物产生氧气,所以我们叫间接的增氧,它本身是不产氧也不耗养的。
      
      另外一点显著的降低BOD和COD,这也是污水处理过程中大量使用的原因。
      
      它有一个显著的特征,就是当你打开盖子的时候独特的气味就是一股尿骚味,非常像厕所里面的尿骚味。
      
      菌体的蛋白质含量可达到60%以上,拌料内服可以作为养殖动物的优良蛋白源,但是我们通常不建议大家用这个菌拌料内服,因为蛋白源很容易获得,而且沼泽红假单胞菌独特的气味可能会导致饲料的适口性下降。
      
      防控蓝藻水华
      
      它还有一个功能就是抑制蓝藻水华,这个是在实践当中摸索出来的。原本我们没有意识到沼泽红假单胞菌和蓝藻之间能够产生一个什么样的竞争,到目前为止仍然也不能够完全说清楚他们之间的关系到底是如何,竞争到底是如何发生的?因为我们没用办法做一个这样的实验,目前还不能够得到一个准确的数据,但是通过实践当中大量的例子它可以抑制蓝藻水华。我们在蓝藻水华发生的初期,不是盛行的时候,刚刚发现一个角,比如十亩的水面可能发现下风处几十个平方有蓝藻的聚集。这时我们使用这个菌和过磷酸钙10-20公斤一亩水面,它能够有效的抑制蓝藻的数量,不让它继续上升,但并不是说把蓝藻杀死掉了,而只是说不让它继续发展成为更厉害的水华,所以应该准确的说形成了一定得生物竞争。
      
      但我们不能寄希望于使用一次就能够成功,而且投入磷肥一定要是水溶性高的,如果水溶性不够高的话或者你投入的过磷酸钙当中可溶性磷比较低的话,那么这个办法成功的几率可能比较低,所以大家以后在使用过磷酸钙过程当中,也要搞清楚你拿到的过磷酸钙产品它的可溶性磷到底有多高,而不是看含磷14%、16%还是12%,要去检测一下可溶性磷有多高。
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    1、使用前是否需要“激活”?

      我们再来聊一聊沼泽红假单胞菌它的正确使用,首先使用前是不是需要激活,这个问题,通常来讲,因为我们的包装,外面都有包装箱,然后里面才是透明的瓶子,瓶子里面装的是菌液,我们生产好之后菌液的浓度基本上在13个亿左右。13个亿是什么意思呢?13亿个每毫升,一个毫升里面有13亿个沼泽红假单胞菌,就是这个意思。

      可能有人会问能不能做到更高?我只能这样回答你:我们曾经做到过超过30亿个每毫升的级别,但是这个非常困难,基本上到顶了。为什么呢,因为所有的微生物都是有体积,虽然我们的肉眼看不到,但是它仍然有体积。因此在有体积的前提下,它就一定会占空间,所以我们不可能把任意一种菌做到一个任意的浓度,说它的浓度要提高多少多少倍,这个是有难度的。当然每个菌的菌体大小不一样,它所获得的空间是不同。大家可以想象一下,同一个空间当中,能够站得多少。就像一个房间只能进1000人,你现在硬要塞2000人进去,那是塞不进去的,上限就是1000个作为,它只有1000个座位。

      所以我们在做活菌制剂的时候要记住,由于它要活下来它就必须要有空间和食物。所以在这两个条件满足情况下,我们才有可能保存它的活性。养殖户要用之前最好是先激活一下,比如明天早上要用,今天拿到菌后将菌拿到阳光下晒上一天或者几个小时,这个也是我们所说的沼泽红假单胞菌这一类的光合细菌我们用之前去晒一下算是激活。

    2、正确的使用时间?
      另外一点光合细菌正确的使用时间,我们一定要搞清楚,光合细菌的名字放在这里了,它是要利用光照产生光合作用,因此光合细菌的正常使用时间应该是在日出之后天亮的时候就可以使用它,而不是说一定要等到九点、十点或更晚。你记住了你用得越早(当然我说的是晴天)它产生作用的时间在这一天当中就越长,比如6点钟天亮了,我6点钟就投菌进去了,到晚上6点钟天黑,它就是12个小时的作用时间,而你10点钟才用,你就只有8个小时的作用时间,因此所有的光合细菌这一类的产品正确的使用时间是是天亮之后尽早。

    3、阴雨天能不能使用?
    第三给问题阴雨天能不能用?实际上阴雨天也是有光照的,阴雨天也是能用的,只是说由于光照相对晴天来说比较弱,菌的功能相对来说得到的效果会比晴天会差一点,但是你非用不可的情况下你也可以用,所以阴雨天依然是可以用得。
      但是大家注意,不管是阴雨天还是晴天,我们都必须注意一点,在有浮头现象发生的时候不能用,因为这个时候你去用,虽然不产养也不耗养,但是浮头到底是什么原因引起的,到底有多严重,或者说是不是有毒物质造成的,最后你都会因为用了某种药物或者咱们的菌,但是人家的浮头更严重,其实跟用这个菌可能没有直接的关系,但是人家可能会找你扯皮,所以有浮头现象的时候是严禁使用的。

    4、按照水面计算还是按照水体计算?
      另外一个用光合细菌这一类的产品到底是应该按照水面计算还是按照水体计算?我们给出一个准确的说法,按水面计算。
      为什么呢?你的面积有多大,我们就按水面来计算,原因很简单,水深1米,超过1米的部分可能光照就很弱,再深你说2米3米或者更深的地方我们人眼能感受的光照可能就没有了,这是在我们的养殖水体里面。但如果在海水里面就不一样了,可能清澈见底,所以在无光或者光线很弱的情况下我们计算水体投放多少光合细菌这样的意义是不大的。

    5、防控蓝藻水华时如何使用?
      防控蓝藻,我们刚才提前讲了一下,蓝藻水华非常旺盛的时候,整个池塘蓝藻水华都已经铺到整个面上了都有了或者至少有一半都有了,这个情况下再用沼泽红假单胞菌再去和它生物竞争,成功的几率就非常低了,因此我们说的防控蓝藻是在蓝藻水华发生的初期。


    幻灯片14.JPG

    我们再来看一下生产沼泽红假单胞菌所需的设备,大家从课件上应可以看到,容积60L的白色塑料桶、漏斗、塑料勺这是用来一级扩培的。
    幻灯片15.JPG


    幻灯片16.JPG

      大家可以看一下课件里面关于菌种及定向培养这张照片,这个照片上很明显有两瓶菌种,一瓶是5L,一共是10L。我们做一级扩培菌种的时候首先是把10升的菌种和2个白色的小袋子,加上1号(有一瓶黄色的液体),加上牛肉膏,把1/10的牛肉膏也就是100g(这个罐子是1公斤),和2小袋500克的固体培养基,加上1号瓶黄色液体把它和100公斤的自来水搅拌均匀(要完全溶解),然后把我们的菌种加进去,再分装。

    幻灯片17.JPG

      也可以用井水,但是井水需要升温,因为井水在夏天的时候温度比较低,用井水的地区最好是把井水头一天灌装到罐子里面,自然的升温,升温之后再来作为我们的需要的生成用水来使用。
      扩培的过程当中大家要注意,晴天基本晒5天左右,阴雨天或最高气温低于20℃时间需要延长,最低气温不得低于15度,并不是说15度以下不能长,是长得非常慢,如果你是在冬天做的话可能就冻死了。 
      每天要摇动一次,防止活菌的沉淀。
    幻灯片18.JPG


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    幻灯片20.JPG



    幻灯片21.JPG

      二级扩培需要容积一吨的塑料罐,白色的半透明的最好,因为你可以看见里面装了多少水还剩了多少,第三个需要搅拌的潜水泵,这个潜水泵把容易沉到水底的培养基把它搅拌均匀,让整个罐子里面都比较均匀的状况下,和我们的菌种也要均匀的混在一起主要起这个作用。还要有容积5L或者你有更大20L的塑料瓶也是可以的。
    幻灯片22.JPG

      一级扩培做成功之后,我们得到了和之前2瓶一样的20瓶一级扩培的成品,一级扩培的20瓶成品我们拿它做菌种,再和2袋子5公斤白色的固体培养基加上2号的黄色液体,加上剩下的900克牛肉膏,又把他们和自来水混合均匀,配成一吨的菌液之后再来生产二级扩培。
      二级扩培和一级扩培的注意事项是一样的,总之大家可以采取5L或者20L的瓶子都是可以的,还有一些我看到我们的养殖户用塑料袋放在水面上或者地面上,当然有些塑料袋的透光度比较低,这样得到的菌液不太好,所以我们建议还是用食用油油壶,它完全是透明的,这样有利于培养。
      另外一点大家要注意的是在高温季节正午时分需要在瓶体外面覆盖遮阳网或者洒水降温,保证菌液的温度不超过45度,同时防治菌种被高温和强紫外线杀死,大家都知道紫外线的杀菌能力是很强的,在正午时分的时候我们一部分活菌会因为没有遮光而被紫外线杀死的问题,这个是我们遇到过得很现实的问题,所以建议大家在夏天高温的时候一定采取降温和遮阳的措施,这个时间段基本是早上十点和下午三点之间都需要采取这样的措施。
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    幻灯片26.JPG


    幻灯片27.JPG

    我先讲一下产品菌液的颜色问题。大家可以看得到,我们给的几张图片。照片上,阴天的状态下,咱们菌液的颜色好像偏暗一些,而在晴天的时候,菌液的颜色就偏红一些,这是属于光线的问题。

    1、出现菌液发绿变淡现象的常见原因
    幻灯片28.JPG

    那么在培养的过程中还会出现菌液的发绿,或者变淡的现象,常见的原因在我们的课件中很清楚,这里我要说一下。首先菌种的接种量过少,这可能是扩培当中没有搅拌或者搅拌不均匀造成的。你可能有几瓶颜色不对头,其它的都很好了。

    第二个可能是水源中有大量的微生物或浮游植物,这里的所说微生物和浮游植物是两码事。大家知道我们的自来水是经过消毒的,从2015年的7月1号开始我们的新国标,自来水消毒只允许使用臭氧和二氧化氯,之前可以用氯气和漂白粉等含氯的消毒剂。但是无论用哪一种消毒剂去消毒,我们大家可以做一个实验,把自来水灌装到干净的矿泉水瓶当中,透明的,把它放在室外的窗台,放上3到5天甚至更长时间一个礼拜,你会发现里面会长出浮游植物来,这充分说明消毒只是一个相对的概念,它不是一个绝对的消毒,否则我们的自来水为什么不能生,就这样喝呢?为什么我们要煮开呢,为什么还要做纯净水呢?就是这个原因。我们在实践当中也发生过自来水厂停水之后又来水,那么刚刚来的水我们把它用于生产用水结果这一批的成品沼泽红假单胞菌大量的都染了杂菌,有很多变绿了,长出了很多的浮游植物,这说明自来水厂停水之后刚刚来水的这一段时间,那个水是很脏的,咱们不光不能用于生产更不能用于生活。

    导致菌液发绿或者变淡的现象还有其他的原因。跟培养基是有关系的,培养基的投放量过低,你投放少了的或者培养基的营养不全面,缺乏一种或几种或着不足这都会造成,最后长着长着慢慢变绿的现象。

      还有如果我们用井水作为水源来生产的话,有一些地区的地下水(就是井水)富含过量的重金属离子太多了,没办法处理,所以作为生产用水也是不合格的,导致菌液出现不是红色而是变成其他颜色,一般是变更或者变黄。
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      还有一个原因我们也发生了,就是生产过程过长菌种衰亡掉了,这个是什么意思呢?原本正常情况下,在华中地区从4月中下旬就可以生产了,因为气温达到了20℃以上,晚间的气温也不会低于12-13℃,这样菌液的温度基本上全天都维持在15℃以上,在这种情况下,一般我们生产一级扩培或者二级扩培在晴天的情况下可能需要5-7天的时间,温度越高,这个生产的时间相对来说就越短,温度越低相对相对来说生产的时间越长,时间越长菌种发生变异的可能性就越大,在这样情况下就会出现部分成品出现变淡变绿的现象。

    2、出现菌液发黄、发黑现象的主要原因
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      另外菌液出现发黄、发黑这个情况也是有的,这种情况通常是有些生产者没有按照要求使用原种作为菌种,而是把扩培几次之后的成品作为菌种,把其中一部分他们认为可以的产品作为菌种,结果菌种已经发生了变异,实际上菌种已经衰退了,这样就出现了菌种发黄发黑的现象

    另外一个原因水源或环境当中的杂菌杂质过多。

    3、沼泽红假单胞菌的使用条件:
      这里说一下使用条件,整个扩培已经说得很清楚了,我们的这个使用一般来说,大家记住,任何微生物制剂我们用到水产养殖的水体当中,都希望水温度达到15摄氏度或者以上,天气晴朗时候最适宜,无论是需要光照或者不需要光照的,基本上都是这样一个原则。水体过肥的时候,早中晚水色没有明显变化的水体,底层水有明显腥臭味的时候,出现藻类水华早期症状的时候,就可以视根据情况使用1到2次沼泽红假单胞菌。

      为什么要水温达到15℃或者以上,原因很简单,之前在培养的过程当中也是一样的,沼泽红假单胞菌实际上在天然的水体当中也是存在的,但是它的量相对来说比较少,我们可以找到它,但是很难。我们往水里面泼洒沼泽红假单胞菌、芽孢、乳酸菌、EM等所有的微生物制剂,我们泼洒进去它到底起到什么作用?

      我这里给大家说一段话:目前我们将各种微生物制剂定期或不定期地投放到养殖水体当中,希望这些外来的微生物菌发挥自生的功能来改良水体的水质和底质,其实包括芽孢杆菌、光和细菌、乳酸菌、EM菌等这些活菌真正能够在养殖水体当中长期大量的的存活、定殖和增殖吗?这个答案是否定的。

      我们刚刚讲了很多菌在天然的水体当中都能够发现,但是大家记住了,乳酸菌这一类的菌在天然水体当中,它几乎存活的时间是很短的芽孢和光合细菌存活的时间会长一些。

      我们试想一下如果我们投入的活菌制剂能够在养殖水体当中大量的存活,长时间的的存活,定殖下来甚至增殖,那么我们只需要投一次就一劳永逸了,那该有多好!但是我们的理想和现实是有区别的。

      实际上当我们把这些产品泼洒到水环境当中之后,活的菌体发挥自身的功能之外,更多的是它们的代谢产物在间接地发挥巨大作用,换句话说,由于我们一次性泼洒的益生菌制剂的总量对于整个水体来说实际上是微乎其微的,因此我们投入的这些菌种只能说是药引子,但是投入这么一点点菌它真的是起了四两拨千斤的作用。

      我们投入的这些所谓的菌种,它引发了一系列的水体当中的生物化学反应,从而导致我们肉眼看得见和看不见的水质变化。在这里我跟大家举个例子,中药当中的药引子,大家都知道这个药引子可能就只有一点点,但是他却起到了把其他的药物的作用激发出来的作用,也就是讲我们投入的很多活菌制剂,真正的活菌制剂,包括一部分代谢产物,投入到水体当中去之后他激发了这个水体当中本身就存在的土著微生物的数量上的增殖,品种上的丰富,最后我们会看到浮游植物大量的生长和繁殖,数量会越来越多。或者说我们投入的这些菌提供了其它微生物所需的微量元素或者提供给浮游植物所需要的营养元素,那么它们利用了之后,又使得我们的水体当中的微生态的生物圈品种更加丰富,数量更多,工人越来越多了。我这里解释一下我们说的工人越来越多的意思,我们水产养殖业最后的产品是我们养的那些养殖对象比如鱼虾蟹,我们投入的大量的肥料和饲料以及苗种,这些是我们的原料,而水体当中的原本存在的微生物和浮游植物以及我们后面添加的这些活菌制剂实际上是我们投入的生产工人。 

      那么我们投入了那么多的原料,如果在这些原料投入之后你不去配相应的各个环节上的生产工人,那么这些原料就不能顺畅地运输到变成我们最终要的生产出来的产品,因此我们把这个概念搞清楚,我们往水里面投微生物的目的是什么,就是去投放在这个整个的生产过程中各个岗位上起各个不同功能功能你们可以理解成为投入的微生物就是工人。 

      下面我给大家说一下沼泽红假单胞菌目前我们能够生产出来的浓度,大于等于10亿个每毫升,实际上刚刚生产出来的一定是13个亿,但是会在6个月之内累慢慢的减少,过了6个月之后它会迅速的减少。
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    本帖最后由 一片云 于 2016-6-23 18:26 编辑

    现在我想和大家简单的讲讲菌种的衰退问题。这个课件将会解答:为什么在养殖水体中需要经常性反复投放活菌制剂?常见活菌制剂成品的保存条件及适宜储存时间?

    幻灯片1.JPG


    幻灯片2.JPG

      这是一个微生物学的基本知识,大家拥有这个知识之后再使用物制剂来讲会更科学,菌种的衰退和复壮,这个概念实际上我们从进化论上去说一下,在生物进化的过程当中遗传性的变异是绝对的,而它的稳定性则是相对的。什么意思呢?大家看一下我们的人类从猿猴变成猿人到古人到现代人,几千年前我们就变成了现在的人基本上是这个样子。
    幻灯片3.JPG

      这里我跟大家说一个故事,这个故事是我们科学家讲出来的,很有意思的一个故事,说人为什么身上没有那么体毛,我们是猴子变得,那么为什么猴子全身是毛人身上没这么多毛,科学家给出了这么一个解释,说的是公猴子在进化的过程当中就发现了毛相对的少的母猴子,它抱的时候觉得比较舒服,因此,他就喜欢和毛比较少的母猴子交配,结果得到的后代,毛也相对来说比较少,就是这么一个成为爱好或者嗜好的举动,导致变成人身上的那一波猴子身上的毛会越来越少,一直到变成猿人、古人到现代人。这就是一个生物进化,那么我们说的退化,包括我们人的囊尾基本上无用了,我们人的运动能力永远不如大猩猩、猴子和人非常相近的领导类的动物,我们的消化功能有没有他们强,他们吃的那些东西我们吃下去会消化不良,一定消化不良,甚至拉不出来,所以进化我们有了文字语言,我们的大脑功能远远超过了那些领导类的同类。
      
      所以,在自然的条件下,个别的适用性变异通过自然选择得到了保存和发展最后成了我们进化的方向,在人为的情况下,我们通过员工的选择去筛选个别正突变体,
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      正突变体的意思就是对我们人类有用的有利的方向的突变体,我们把他留下来,用于实践当中。相反的如果不进行有意识的人工选择,那么大量的自发的突变的菌株就会泛滥,最后使菌种衰退。
      
      所以大家想一想我们泼洒到水体当中的生物活菌它原本在我们给它的提供的,比如讲,只能让它生长,提供给它定向的培养基,在一个小的容器当中去给他一个恒温,比如说我们乳酸菌就得恒温,液态的芽孢也得控制温度,我们做沼泽红假单胞菌也是给他提供相对的来说最适宜的温度让它生长,但是我们把他泼到水体当中情况就不一样了,第一、它没有全面一样的培养基,第二、当泼洒到水体之后它的浓度稀释之后它变成了少数,它不是多数,他要和周围的环境发生广泛的接触,它要和周围的竞争者发生竞争,甚至会被能够吃掉它的大型的微生物给吃掉。
      
      比如讲,一些原生动物包括一些小型轮虫等,它们也都能够吃掉一部分微生物,所以我们投入到水体当中的微生物,刚刚讲了,他可能要衰退了,第一它自己要变异了,第一它为了适应环境,它之前的环境适宜它生长,现在就不行了,那么我们这里,先插进去一个微生物所说的事情沼泽红假单胞菌,他是如何繁殖的。
      
      细菌的繁殖通常就是一分为二的,大家记住了,它从中间开始变窄,最后把原来的一个变成两个,它就是这么繁殖的,这种一分为二的繁殖和我们人类的爸爸妈妈生小孩是完全不同的,我们人类生下来的,比如讲我生下了一个女儿,她既不是她妈妈又说,也不是我,而是另外一个人。而细菌就不一样了,细菌的分裂繁殖它生下来就是它自己,就是在它没有退化没有变异的前提下,它生下来的就是它自己。但是如果它衰退了或者他变异了那么它一分为二之后就不是它自己了。
      
      因此我们说,任何细菌在自然条件下,遇到环境的不适应或者营养成分达不到它的要求,它都可能发生一些变异,所以我们投入到水体当中的这个活菌就很容易在自然条件下发生变异,就不能够维持原有的功能,因此我们会在一段时间之后再去投同样的菌,再让它发挥一定的作用,这个作用的时间可能是2-3天过后就没有了,甚至更短,也可能稍长,根据不同的菌种结果是不一样的
      
      菌种的衰退,我想重点跟大家讲这些,因为课件上面都有大家可以看得到,这是一个基础知识。
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      菌种的复壮相对来说我就讲得更简单了,因为很多生产企业没有这个条件去生产它,去做这个复壮的工作,它需要一个相对来说很专业的技术人员,然后需要更专业的相关的硬件条件,相关的设备,所以一般不建议不具备这些相应设备和技术人员条件的生产企业进行复壮的工作,这个成功率并不高。
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      至于什么品种可以作为冻干粉,我这个仅仅限于目前市场上销售比较多的品种,比如说乳酸菌、沼泽红假单胞菌都可以做冻干粉,干燥的粉剂常常指的是芽孢这一类包括粪链球菌,做液态制剂,就是活菌制剂去保存的,有复合乳酸菌,我们说的复合乳酸菌就是多种乳酸菌,我们在农业部1126号文件中可以看的到的,十多种乳酸杆菌,我们简称上乳酸菌或者乳酸杆菌,这些都是可以的
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      至于说保存时间算是我刚才也提到过,如果真正的冻干粉那么它保存的时间相对来说是比较长的,在常温、密封、避光、阴凉的储存条件下,真正的冻干产品可以保存2-3年,它的这个菌数基本不会下降,活性也能够保存下来。而液态的通常是6-12个月,唯独比较特殊的是芽孢杆菌,它的保存时间很长很长,有多长的我们不好说,因为什么呢,因为目前国标说的就是24个月。
      
      我想关于沼泽红假单胞菌就到这里。
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    以上就是今晚的内容,剩下的内容我明天再上传吧
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    亲朋好友 发表于 2016-6-16 20:43
    什么时候开讲还是发微信?

    已经讲完了,由于今晚我的网速慢,所以没来得及更新
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    今晚的网速让我抓狂啊,一会有一会没
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    6月18日晚交流的内容
    乳酸菌的建议扩培及应用

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    目前乳酸菌制剂在水产养殖业中,泼洒在水体中的量远远大于拌料内服的量。其在畜禽养殖业中不会泼洒到环境当中,而是通常添加在饲料中,但是用量不大。

      一、乳酸菌简介
      
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      通常我们所说的乳酸菌也叫乳酸杆菌。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。凡是能在葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。除极少数外,其中绝大部分都是动物体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群。人类肠道含有大量的乳酸菌群。养殖动物的肠道里面(尤其是恒温动物)含有大量的乳酸菌群,水产养殖动物的肠道中也有。
      
      常见的菌种主要包括嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、粪链球菌等,这些都属于兼性厌氧、革兰氏阳性菌。在有氧的条件下它们同样也是能够存活和继续繁殖。
      
      我们在超市里面买的各种各样的酸奶实际上都是很多种被卫生部批准用于人食用的乳酸菌的发酵产物。咱们定期的在食物中补充一定的酸奶能够促进消化,增加肠道内的有益菌群数量,提高免疫能力。
      
      今天讲的主题是干酪乳杆菌,以它为代表,把它放在水产养殖业中是因为干酪乳杆菌的功能正好被水产养殖业能够利用到,而且我们认为它比其它几种乳酸杆菌的效果更好一些。


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    本帖最后由 一片云 于 2016-6-23 17:59 编辑

      二、乳酸菌在水产养殖中的作用

    幻灯片3.JPG

      
      乳酸菌在水产养殖业中的作用主要体现在以下几条:
      
      1.肉眼可见的:诱食、肥水; 用于外环境的时候,早上用第二天肉眼就可以见到鱼的食性增强。比如说在没有用乳酸菌之前,吃食鱼在早上的欲望比较低,吃食鱼的面积相对来说小一些。用了乳酸菌之后,第二天早上同样的时间段你再去投喂,会发现吃食鱼的面积明显比没有使用乳酸菌前扩大了,而且是很明显的扩大了,跟下午是一样的。这就说明,它有一个肉眼可见的诱食作用。其实这个诱食的作用就是改良了水质。 还有一个,你会发现用了之后水通常会变肥。变肥指的是水体当中的微生物、浮游植物、原生动物、浮游动物等在水体当中数量变多了,也就是增殖了,多了之后我们肉眼看到的就是水变肥了,就是这么一个现象。
      
      2.间接的增氧、改良水质;
      
      乳酸菌由于它把水体变肥了,会对水体产生间接的增氧作用。虽然它本身不产氧,但是它培养了大量的浮游植物,因此间接的增氧作用是很明显的。
      
      3.喷洒在饲料上投喂,增加养殖动物肠道内有益菌,显著提高饲料利用率;提高免疫力,降低肠道疾病发生率。
      
      在水产养殖中,我们也会把乳酸菌制剂按照一定的比例喷洒到饲料中投喂,增加养殖动物肠道内的有益菌(当然这个要求就是你拿到的乳酸菌制剂是真的是活菌,而不是纯的代谢产物,这个问题我想后面要专门说一下)。
      
      喷洒到饲料上可以显著的提高饲料的利用率、降低饲料系数,提高养殖对象的免疫力,降低肠道疾病发生率。
      
      这里有些科研的报告,我想给大家说一下。我们用乳酸菌投喂之后和之前草鱼肠道内的肠壁皱褶发生明显的改变。饲料添加乳酸菌其结果是中肠、后肠的肠壁皱褶都明显的变多了、变长了、变密了,意味着肠道内壁的表面积扩大了。食物和肠道内壁的接触的表面积扩大之后,它吸收食物当中的有效成分的速度就更快了,消化功能也提高了,食物的分解更彻底了,营养吸收得更多了,结果有效地降低了饲料系数,提高了肠道内的有益菌的数量。
      
    幻灯片4.JPG

      根据2008年农业部批准的使用的饲料添加剂中的安全微生物,农业部的公告1126号文件,实际上有十多种都是乳酸菌。

      干酪乳杆菌
       幻灯片5.JPG

      今天讲的干酪乳杆菌我们称之为水产专用,因为在相应的对比实验中干酪乳杆菌应用到水环境中的效果比其它的乳杆菌表现得更突出一些,虽然这个差别不是特别的明显,但是我们还是认为以这种菌为主的话可能得到的结果会比其他的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌为主的效果好。

    幻灯片6.JPG



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    本帖最后由 一片云 于 2016-6-23 18:00 编辑

    三、菌种来源
      
    幻灯片7.JPG


      菌种经过农业微生物学国家重点实验室保种和选育,然后经过华中农业大学生命科学技术学院一级扩培,再到我们公司的二级扩培,最后做成成品来销售。
      
      之前,乳酸菌主要还是用在城市生活污水处理当中,在这个过程当中我们发现把乳酸菌运用到水产养殖业上也可以起到很好的效果,因此乳酸菌在08年的时候我们才开始逐步的往水产养殖业上推广干酪乳杆菌,实际上我们现在生产的是以干酪乳杆菌为主的复合乳杆菌。
      
      我就不再重复地去介绍我们的华中农业大学生命技术学院了。因为在之前已经讲过了。

    幻灯片8.JPG


    幻灯片9.JPG


    幻灯片10.JPG


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    本帖最后由 一片云 于 2016-6-23 18:01 编辑

      四、乳酸菌的扩培

    幻灯片11.JPG

      
      乳酸菌简易扩培需要的设备(我们现在讲的都是简易扩培,指的是大型的养殖户或者小养殖户都可以做到)
      
      1、容积1吨或者0.5吨的不透明的塑料罐,白色为宜。如果你是小养殖户,可以采取有盖的白桶,密封的都是可以。
      
      2、恒温电加热控制装置,因为乳酸菌在恒温动物中大量的存在。比如说我们人类的体温正常体温36.5℃左右,差别不会太大。猪马牛羊鸭等也基本上是37-40℃这个样子,体内的温度相对来说是非常稳定的。在培养乳酸菌制剂的过程中也要求培养的温度基本保持在38℃。
      
      3、自来水——无菌水制备设备,和家里送来的纯净水实际上就是用这个设备做出来,原理是一样的,有大有小,大家可以看到后面的课件上的不锈钢的设备。
      
      4、功率不超过100瓦的潜水泵。潜水泵起的作用是不断的在罐体内搅拌,把容易沉到底部的比较的培养基均匀分布在罐体内(被我们的菌种利用掉)。
      
      这些设备温控装置很简单,你也可以做得更精致一些,像图像上这种温控装置的成本大概不到200块钱。如果你要做得更精致一点的话,可能要加一个配电箱(相应的东西全部装在配电箱里面),再配上一个温度探头再配上一个U型的加热管,加起来的成本可能就超过300块了。
      
    幻灯片12.JPG

      大家看干酪乳杆菌简易扩培设备这张图,图中罐体中只有1/3的发酵,这是一个浓缩发酵。也就是一组培养基+一组菌种,然后只加了330kg无菌水,最后再发酵的过程。也就是有些企业做1L的产品,1L EM菌或者乳酸菌用于3亩的水体的这样一个浓度的浓缩液。也可以把罐子里面的无菌水(990kg)全部加满,做成一般的市场上5升的瓶子装用于5亩水体的浓度的稀释液。浓缩和稀释的实际上最后的比例是一样的,用量的比例是一模一样的。
      
    幻灯片13.JPG




      另外一个罐子无论是方的还是圆的都不影响产品的质量。
      
      自动温控搅拌装置
      
    幻灯片15.JPG


      大家可以看到一个很简单的塑料的潜水泵和一个热得快。热得快是针对小型养殖户的,他用这种就可以了。但这热得快只有1.5千瓦,它比较容易烧坏。建议如果用1吨的大罐子去做简易扩培的话就用3千瓦的工业用的加热管,加热管相对来说,速度更快,而且不容易坏,这张温控设备上有一个电子温控器和空气开关这都是为探头服务的。
      
    幻灯片14.JPG


      不锈钢过滤罐
      
    幻灯片16.JPG


    幻灯片17.JPG


      无菌水从不锈钢过滤罐的上方进入,从下方出来(图片没有把下方照出来)然后通过紫外灯的灭菌装置一头进一头出,那么基本上可以把水当中的杂质以及浮游植物和所有的微生物都能够杀死掉了,接近于纯净水的标准(我们说的无菌水就是这个意思)。通过这两个设备得到的就是无菌水,这个无菌水我们就把它加入罐体当中。

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    本帖最后由 一片云 于 2016-6-23 18:02 编辑

      五、干酪乳杆菌菌种定向培养基
      
    幻灯片18.JPG


      照片当中只照到了5个5L的瓶子,其中2个比较浅的灌得比较满的咖啡色瓶子是两瓶菌种,剩下的3瓶就是培养基。实际上标准化的是4瓶培养基,图片上只照了3瓶。
      
      1、培养基的原料配方
      
    幻灯片19.JPG


      浓缩乳酸菌原料配比:10L菌种+ 330kg的无菌水;
      
      成品乳酸菌原料配比:10L菌种+990kg的无菌水
      
      2、培养方法
      
    幻灯片20.JPG


      ①        首先将乳酸菌的浓缩培养基加适量的水煮沸5分钟以上(大家记住一定要煮沸5分钟以上),杀灭其中所有的微生物。如果不到5分钟,没有煮沸,那么做出来的杂菌可能就比较多。
      
      ②        补充无菌水到330kg,或者做直接的产品,那你就直接补到990kg。
      
      ③        加入菌种开始培养,培养的过程把培养液的温度保持在35-40℃,建议直接在温度控制开关上把它调整到38℃,这是最合适的。
      
      在38℃恒温条件下培养36-48个小时,基本上可以完成培养。如果你要做稀释的,那在这个时候再加入660公斤无菌水就可成为乳酸菌的成品,灌装或者直接使用。
      
      乳酸菌的稀释成品和浓缩成品到底有什么区别?无非就是浓缩的1L用3亩水体而稀释的1L只能用1亩水体,所以大家在市面上买的相应的乳酸菌类的产品,5升装的如果用5亩说明他用的是我们说的990公斤水加上培养基和菌种做出来的。如果1L的产品可以用3亩水体那就是浓缩的方法做出来的(还能不能更浓缩了呢?不能了)。
      
      乳酸菌的浓度问题,因为乳酸杆菌是有体积的,虽然它很小。目前这种大规模的工厂化生产,简易扩培的方式,能够做到的最高浓度基本上也就是我刚才讲的330kg无菌水+一组定向培养培养基+菌种,然后灌装出来的成品。如果你同样灌装5L的油壶,你就可以用到15亩水体。

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    本帖最后由 一片云 于 2016-6-23 18:03 编辑

      六、注意事项
      
    幻灯片21.JPG


      1、在扩培乳酸菌过程中,先加入无菌水,其次加入煮沸5分钟以上的定向培养基。加水需要很长的时间,所以我们一边加水一边煮培养基。培养基煮沸5分钟以上后,再把它倒入到罐体中,水可能还没加满,这时候你一定要注意在加水的过程中尽可能的将培养容器的盖子盖在口子上面,减少空气当中的细菌落入到罐体中的机会。另外等所有的东西都加好后一定要盖盖子。
      
      盖完盖子之后还建议大家用胶带密封,以免空气中的微生物掉到罐体当中造成污染,蚊虫都有可能在简易扩培时飞到罐体中去(这个是经常发生的)。
      
      2、培养容器使用过后要及时清洗,使用前还要用消毒剂进行消毒处理(消毒剂通常是二氧化氯),将二氧化氯直接喷雾到罐体的体壁上下,进行全部的喷雾,进行消毒处理,消毒之后要继续生产乳酸菌的话,再用无菌水把整个罐体冲洗一遍,把消毒液冲走,变成一个无菌的状态就可以了。
      
      3、注意接种时培养液的温度不能高于45℃,防止菌种被杀死。因为乳酸菌温度过高的时候会被高温杀死,所以在生产过程中,大家要记住这个步骤:首先把罐体消毒完之后用无菌水冲洗一次,然后把水放掉,再开始加无菌水,加无菌水的同时把培养基煮沸5分钟,煮沸之后马上倒进去,这个时候水可能还在加,等到水加到快满的时候再把菌种加进去,菌种加了之后立刻将搅拌装置、温度探头、工业用的加热管消毒过后全部放到罐体当中。
      
      4、        成品应为正常发酵酸香味,有异臭味则污染杂菌。
      
    幻灯片22.JPG


      5、温控装置可以采用热带鱼养殖的电加热温控方式。小规模的生产可以在桶里面做,用电加热的装置。如果温度加不到38℃,只能加到35℃也是行,但是培养的时间就延长。
      
      6、无菌水的制备过程就是要用自来水经一级过滤和紫外杀菌器处理获得。没有自来水的地方或者在偏远的湖泊(不是水库),用池塘里面的水或者井水也是可以,但是必须要把它曝气或者烧开,尽可能的消毒。
      
      7、最好使用新鲜的菌种(我公司提供的乳酸菌菌种保质期30天),放置时间越长活力就越低,菌数相对来说会下降。
      
      成品菌液的浓度基本上可以达到100亿个/ml。
      
      成功的制备完毕之后,pH基本上都在3.8左右。能不能做到更低呢?可以。pH可以达到 3.6甚至更低,当pH值低于3.8的时候罐体内的乳酸菌等有益菌数量会随之下降,它虽然是产乳酸的,但是乳酸菌本身对酸的忍受能力是有限的,当pH过低或者低于3.0的时候,大量的菌都被它自己产生的酸杀死了。
      
      我们在生产过程发现有些养殖户做得乳酸菌的pH低于3.8甚至更低低于3.0,但把这个产品泼到水里面后仍然是有效的。大家就会问照你这么说活菌都被杀死了一部分,没有 pH值3.8的时候那么高了,为什么你泼进去还是有效呢?实际上乳酸菌比较特殊,乳酸菌本身相对沼泽红假单胞菌和芽孢杆菌活菌来说能够存活下来是比较难的,因为条件不适应。
      
      那么问题又来了,我们投下去这些东西到底是什么在起作用呢?是乳酸菌的活菌在起作用还是乳酸菌的代谢产物在起作用呢?实际上乳酸菌的活菌是能够起作用的,在水体当中在它能够存活的不长的时间里,它也起到了很好的作用。它的代谢产物能够促进水体当中的土著微生物包括浮游植物的生长和繁殖。说白了,乳酸菌制剂的代谢产物是其他土著微生物和植物的营养源(我们可以这样理解),当然不是说,它是唯一的营养源而是锦上添花一般的营养源。

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